满满的干货！制药行业的微生物知识

微生物的入门知识这里不详细说明，主要讲述关于制药微生物的常见的部分知识北京ktv点！

一、生物检查法

1.无菌检查

阉割无菌检查中国药典的说法是，无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

常用培养基：

①硫乙醇酸盐流体培养基（培养温度30-35℃，主要检查厌氧菌和需氧菌）

②胰酪大豆胨液体培养基（培养温度20-25℃），也就是我们常说的TSB，胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。

部分琼脂培养基也可以用于无菌检查，如沙氏葡萄糖琼脂培养基和马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA) 等等，但是液体的较常用，适用于各种各样的样品，同时也较灵敏和直观，一般样品都是培养14天观察无菌生长为合格（光检无浑浊）。

知识点1：无菌检查必须在无菌条件及环境下进行。一般微生物检查都会划分为阳性对照室、微生物限度室和微生物无菌室，其中微生物无菌室就是专门为无菌检查而设立，检查我们生产的无菌或灭菌产品是否真的达到没有菌生长的水平。

知识点2：培养基必须灭菌彻底，培养基也要做适用性检查（无菌性/灵敏度）。另外阴性对照与阳性对照必不可少，通常我做实验会在灭菌时放灭菌指示剂和做两种阴性对照。一种阴性对照是从头到尾不开封，主汽车钢要验证我的灭菌效果；剩下的一种不接种样品，但操作完全与接种样品的一致，主要验证我操作过程有没有失误及环境是否无菌，检查是否引入了外在微生物的污染。

知识西蜀子云亭点3：不同的培养基对应不同的样品，上面说的培养基是较通用的，个别如硫酸链霉素等抗孩子的眼睛生素的无菌检查就要用0 . 5 %葡萄糖肉汤培养基。药典规定每批培养基一般随机取不少于5支（瓶），数量达标且合格才可以保证这样品真虹桥商务区的是无菌，一支两支是不具有代表性的，也没有说服力。

无菌检查的方法包括薄膜过滤法和直接接种法。前者用于不含抗菌药物制剂，后者抗菌不抗菌药物制剂都可以做，所以只要样品性质允许都推荐使用薄膜过滤法。直接接种法百科词条我就不多说了，薄膜过滤法法一般应釆用封闭式薄膜过滤器，根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45μm。滤膜直径约为50mm，若使用其他尺寸的滤膜 ，应对稀释液和冲洗液体积进行调整，同时需要应保证滤膜在过滤前后的完整性。具体操作请看药典。

2.微生物限度检查(非无菌）

非无菌产品、制药用水、环境监测（沉降菌、浮游菌、表面菌）、初始菌等等一系列都涉及到微生物限度检测。

下面是我软件工程师认证公司的一些微生物限度检验的项目，供参考。

注意：首先做微生物检验要有强烈的无菌意识，洗手消毒或是洁净服n2报名穿戴都要严格按标准执行，阴性阳性对照要记得做，如有棉签取样这类的，需要做校正因子或回收率。同时也需要注意安全，操作过程需要经常用酒精消毒，同时操作要在酒精灯附近进行，注意用酒精消毒后不要太靠近酒精灯火焰，应该等一段时间，酒精挥发后才慢慢靠近火焰继续操作。

二、微生物的鉴定

微生物鉴定的用途：

医疗保健、临床上：准确、快速地鉴定细菌、真菌和寄生虫，以进行正确和及时的疾病诊断，并进行适当的治疗。

流行病学、微生物研究：可以追踪部分病原体与一些疾病的传播，以及鉴定抗生素耐药等。

制药工业、医疗器械、化妆品、食品行业：微生物对食品、化妆品来说至关重要，对无菌的药品也产生重大威胁，所以环境微生物与药品（非无菌）中微生物的准确鉴定通常是这些行业能够进行良好的生产与产品的质量工作上的要求。香港教育

中国药典中微生物鉴定的方法分为表型微生物鉴定和基因型微生物鉴定。（9204微生物鉴定指导原则）

（1）表型微生物鉴定

四大类微生物的细胞形态和菌落特征

外观鉴别的程度往往很低，对于我现状来说，微生物鉴定最常用约翰亚当斯的方式户外防潮垫的革兰氏染色后镜检和鉴别培养基培养。

常见的革兰氏阳性菌有:葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白氨甲环酸喉杆菌、破伤风杆菌等。

常见的革兰氏阴性菌有:痢疾杆菌、伤寒杆菌、芒果可以放冰箱吗大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌及脑膜炎双球菌等。

革兰氏染色要注意：

1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。

２、涂片不宜黄昏之星过厚，以免脱色不完全造成假阳性。

３、脱色是少昊革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。

上图这是我做的一批菌种鉴别，首先革兰氏染色，然后在显微镜下找呀找呀，最后清晰拍下来的图片。首先从颜色看呈蓝紫色是革兰氏阳性菌，并且形态是球状的，再通过做鉴别培养基（BP培下司犬养基）有下图这样的光圈的，可以基本判别是金黄色葡萄球菌。

还有就是伊红美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌等，这一系列都是通过细菌的代谢产物对培养基中的部分物质之间产生的特征性变化从而进行鉴别。

上面的微生物鉴定都是比较传统犬粮的方法，现在其实多了很多创新的方法，尤其在分子生物学领域，可以通过细菌DNA特征序列鉴定（2020版中国药典四部新增）、免疫荧光等很多方法。不过普通的制药企业还是用传黄山旅游线路统方法较多。

最后给大家科普一个微生物的小知识：环氧乙烷灭菌生物指示剂用到的萎缩芽孢杆菌（2020版中国药典四部）其实就是枯草芽孢杆菌黑色变种，枯草芽孢杆菌黑色变种是旧称。

枯草芽孢杆菌≠枯草芽孢杆菌黑色变种

萎缩芽孢杆菌=枯草芽孢杆菌黑色变种

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